黃曲霉毒素前處理方法如上圖所示，但目前的前處理方法普遍存在操作步驟繁瑣，樣品損失嚴重，耗時長，且需要消耗大量的有機溶劑，回收率不高等問題。

在上一版的標準中采用免疫親和柱凈化法，基于免疫親和的原理來實現(xiàn)凈化除雜，雖然能夠?qū)崿F(xiàn)較好的凈化效果，但是該方法的成本較高，難以被實驗室普及使用。因此亟需建立一種快速、準確、方便的黃曲霉毒素前處理凈化方法，有利于監(jiān)控食品、調(diào)味品、飼料和茶葉中黃曲霉毒素的含量，從而保障食品安全。

標準頒布

為了滿足當前國內(nèi)糧油檢測、監(jiān)測定量分析的要求，2020年7月，國家糧食和物資儲備局發(fā)布的《LS/T 6138-2020 糧油檢驗糧食中黃曲霉毒素的測定免疫磁珠凈化超高效液相色譜法》標準開始正式實施。該標準擬利用免疫磁珠的凈化，基于液相色譜檢測，建立一種高通量、快速、重復(fù)性好、易于自動化的黃曲霉毒素精準定量分析方法。

標準編制說明中指出：使用免疫磁珠法進行樣本處理既能保留免疫親和柱良好的凈化效果和穩(wěn)定性，又能夠減低操作難度，減少操作時間和勞動強度，易于自動化處理。

標準看點之磁珠新用

標準看點1：檢測項目、原理及檢出限

標準適用于小麥、玉米、稻谷和植物油等糧油樣品中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的測定。各類物質(zhì)檢出限如下表。

標準中規(guī)定了免疫磁珠凈化超高效液相色譜測定糧食中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2（AFB1、AFB2、AFG1、AFG2）的原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、測定、結(jié)果計算和精密度等內(nèi)容。

黃曲霉毒素檢出限一覽表

檢測原理

2. 新舊標準樣品前處理方法對比

免疫親和柱凈化法樣本處理流程圖

免疫磁珠凈化法樣本處理流程圖

從兩張流程圖對比可發(fā)現(xiàn)：

采用免疫親和柱凈化法對于樣本處理需要精提后進行凈化，操作步驟繁瑣，樣品損失嚴重，耗時長，且需要消耗大量的有機溶劑，污染大；而采用免疫磁珠凈化法樣本處理只需粗提，且步驟簡單易操作，耗時也較短；這一新標準的頒布，無疑是對食品安全檢驗更有效率的保障。

3. 標準中對免疫磁珠的性能要求

免疫磁珠與樣品稀釋液的反應(yīng)時間是磁珠凈化的關(guān)鍵，將免疫磁珠與濃度為5μg/kg黃曲霉毒素B1標準溶液反應(yīng)，分別考察不同反應(yīng)時間（1、3、5、10、15分鐘）結(jié)合效率，可以看出，反應(yīng)5分鐘后磁珠吸附毒素信號基本不變，說明5分鐘的反應(yīng)時間可以滿足免疫磁珠反應(yīng)的要求。

不同反應(yīng)時間下免疫磁珠富集的AFB1含量

拓展看點

免疫磁珠結(jié)構(gòu)示意圖

磁珠提取法通過調(diào)節(jié)緩沖液pH值，利用靜電吸附作用與磁珠實現(xiàn)有效結(jié)合，之后在外加電場的條件下，去除廢液并加以洗滌，最終實現(xiàn)樣本提取處理目的。

磁珠的方法避免了抽真空和高速離心等步驟，可以減少外力對樣品的損傷。該方法操作便捷，試劑簡單，而且適用于在96孔板或384孔板中的高通量自動化操作。

隨著技術(shù)的進步，越來越多的廠家開發(fā)了不同的基于免疫磁珠提取試劑盒。磁珠表面多種多樣的化學修飾為實現(xiàn)復(fù)雜的實驗帶來了可能。

磁珠提取法（圖片來自網(wǎng)絡(luò)）

背景小姿勢

黃曲霉毒素（Aflatoxins，AF）是一種化學結(jié)構(gòu)類似的二氫呋喃香豆素的衍生化合物。在自然界中存在廣泛，種類較多，主要常見的包括黃曲霉毒素B₁、黃曲霉毒素B₂、黃曲霉毒素G₁和黃曲霉毒素G₂. 該物質(zhì)對人畜有強烈的致病性、致癌性，嚴重危害人體健康，其中黃曲霉毒素B₁被世界衛(wèi)生組織（WTO）的癌癥研究機構(gòu)（IARC）劃定為I類致癌物，其毒性是氰化鉀的10倍。

黃曲霉毒素B₁

國內(nèi)外非常重視黃曲霉毒素的防控，為控制黃曲霉毒素污染的危害，國家法典委員會（CAC）和美國食品與藥品監(jiān)督管理局（FDA）規(guī)定食品中黃曲霉總量不能超過15μg/kg。

GB 2761-2017 《食品中真菌毒素限量》國家食品安全標準中規(guī)定的各類物質(zhì)限量標準

海貍免疫磁珠助力高通量和快速食品檢測

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